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伍 莉 西南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院
王一鳴 徐 琴 魏福建 西南農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院
摘 要 用微生態(tài)制劑EM作為飼料添加劑飼喂大口鯰，經(jīng)40 d的試驗(yàn)，測定其血液學(xué)指標(biāo)（包括紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞大小、紅細(xì)胞滲透脆性、白細(xì)胞分類記數(shù)、紅細(xì)胞沉降率和紅細(xì)胞比積）。結(jié)果顯示，試驗(yàn)組大口鯰的紅細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白含量等指標(biāo)均優(yōu)于對照組。表明EM能改善大口鯰的血液學(xué)指標(biāo)，提高機(jī)體的新陳代謝，加快其生長速度。
EM是英語Effective和Microorganisms的縮寫，是目前比較常見的一種微生態(tài)態(tài)制劑。它是由日本琉球大學(xué)比嘉照夫教授于80年代初從天然環(huán)境中篩選出微生物菌體，培養(yǎng)、繁殖后制成的含有大量有益菌的活菌制劑，由光合細(xì)菌、乳酸菌、醋酵母菌、放線菌等10個(gè)屬80多種微生物復(fù)合培養(yǎng)而成。EM不含任何化學(xué)有害物質(zhì)，無毒副作用，無殘留和二次污染，不產(chǎn)生抗藥性。目前已在日本、巴西、美國、中國、泰國等40多個(gè)國家推廣使用，在促進(jìn)植物生長、增強(qiáng)畜禽抗病能力、增強(qiáng)養(yǎng)殖對象的免疫力、去除糞便惡臭、改善生態(tài)環(huán)境和提高產(chǎn)品質(zhì)量等方面都表現(xiàn)出良好的效果。EM目前在整個(gè)水產(chǎn)養(yǎng)殖中大多是直接作用于水體，其作用機(jī)理主要是EM原露滲入水體后，能抑制病原微生物和有害物質(zhì)，調(diào)節(jié)養(yǎng)殖的生態(tài)環(huán)境，提高水中的溶氧量，促進(jìn)養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)中的正常菌群和有益藻類活化生長，保持養(yǎng)殖水體的生態(tài)平衡。EM若拌入餌料投喂，可直接增強(qiáng)魚類的吸收功能和防病抗病能力，促進(jìn)其健壯生長。
大口鯰（Silurus meridionalis Chen）原名南方大口鯰，俗稱河鯰、鯰巴朗、叉口鯰等。它為鲇形目、鲇科、鲇屬，在天然水域中以魚蝦為食，是兇猛的肉食魚類。它是我國長江出產(chǎn)的名優(yōu)魚類之一，目前已在我國大力推廣養(yǎng)殖。關(guān)于大口鯰的生物學(xué)特性和養(yǎng)殖等已有較多研究，但是關(guān)于在其飼料中添加微生態(tài)制劑對其血液學(xué)指標(biāo)影響的研究報(bào)道卻很少。而這方面的研究結(jié)果對于了解大口鯰的正常生長和進(jìn)行人工飼料的研究并改良目前的養(yǎng)殖方式、推廣健康養(yǎng)殖有著重要的意義。筆者旨在通過對用不同濃度EM原露飼喂的大口鯰血液學(xué)指標(biāo)進(jìn)行測定，了解添加微生態(tài)制劑EM對其血液學(xué)指標(biāo)的影響，為合理配制飼料、改善魚的體質(zhì)、降低養(yǎng)殖成本、提高養(yǎng)殖效益、推廣養(yǎng)殖新模式提供一定的理論依據(jù)。
1 材料和方法
1．1 試驗(yàn)材料
1．1．1 EM原露 由江西天意生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供,每毫升菌液活菌數(shù)不少于108個(gè),pH值≤3.5，棕褐色。
1．1．2 試驗(yàn)魚 將800尾大口鯰隨機(jī)分為4個(gè)試驗(yàn)組，每一試驗(yàn)組設(shè)一平行。1#、2#為對照組，其余為試驗(yàn)組。每組放養(yǎng)100尾大口鯰，分別統(tǒng)計(jì)每組試驗(yàn)魚的平均始重、平均體長等數(shù)據(jù)。試驗(yàn)各組均用1.7m×1.8m×0.7m水泥池進(jìn)行微流水養(yǎng)殖。先將魚暫養(yǎng)1周，待魚全部適應(yīng)環(huán)境、正常攝食后開始試驗(yàn)。
1．1．3 EM增活及飼喂方法 將EM原露、紅糖、常水按1kg：10kg：150kg比例混合，在30～33℃條件下靜置24 h增活微生物，按餌料重的0、2、4、6 %的比例量取EM發(fā)酵液，噴于餌料上，晾干投喂。每天早上07：00、傍晚19：00、夜間23：00左右各喂1次，投餌量以魚0.5 h內(nèi)吃完散開關(guān)略有剩余為標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)時(shí)間為40 d。
1．1．4 基礎(chǔ)日糧（見表1）。
1．2 樣本處理
試驗(yàn)結(jié)束后先停止投食，讓魚饑餓1 d后統(tǒng)計(jì)每組魚的數(shù)量，測量體長，稱重，即得每個(gè)試驗(yàn)組的生長數(shù)據(jù)，再與試驗(yàn)前的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，即可得出添加不同濃度的EM對大口鯰生長狀況影響的差異（見表2）。最后斷尾取血，進(jìn)行紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞沉降率、紅細(xì)胞比積等8個(gè)血液學(xué)指標(biāo)的測定。
1．3 測定方法
1．3．1 血紅蛋白含量 沙利氏法。
1．3．2 紅細(xì)胞數(shù) 以赫姆氏液為稀釋液，將血樣稀釋200倍后，用血細(xì)胞記數(shù)板記數(shù)。
1．3．3 白細(xì)胞數(shù) 以提爾克氏溶液為稀釋液，將血樣稀釋20倍后，用血細(xì)胞記數(shù)板記數(shù)。
1．3．4 紅細(xì)胞大小 用測微尺在油鏡下，每尾魚血涂片測量10個(gè)紅細(xì)胞長徑和短徑，取其平均值。
1．3．5 白細(xì)胞分類記數(shù) 用瑞氏染液將血片著色，于油鏡下分別記下各類白細(xì)胞的百分比率。
1．3．6 紅細(xì)胞脆性 用1 %NaCl溶液配成不同濃度梯度低滲溶液，室溫下靜置2 h，觀察溶血結(jié)果。
1．3．7 紅細(xì)胞沉降率 用Westergren法進(jìn)行測定，最后讀取紅細(xì)胞沉降的毫米數(shù)。
1．3．8 紅細(xì)胞比積 將抗凝血裝入紅細(xì)胞壓積管內(nèi)（溫氏壓積管），再以4000 r/min的速度離心30 min，最后計(jì)算紅細(xì)胞比積之百分?jǐn)?shù)。
2 試驗(yàn)結(jié)果
2．1 生長情況
由表2可知添加不同濃度EM對大口鯰的生長影響，由高到低依次為6 %＞4 %＞2%＞0。隨著添加濃度的減小，EM對大口鯰的促進(jìn)生長作用也隨之減小。當(dāng)EM為最大濃度6 %時(shí)，其平均增重比對照組高出27.39%，促長效果極其明顯。試驗(yàn)過程中添加EM的3個(gè)試驗(yàn)組大口鯰僅出現(xiàn)零星死亡（大口鯰相互爭斗、殘殺造成體表受損而患病所致），而未添加EM的對照組則成活率明顯受到影響。
2．2 血液學(xué)指標(biāo)
由表3可見添加不同濃度EM對大口鯰的血液指標(biāo)影響情況。添加不同濃度的EM均能優(yōu)化大口鯰的血液學(xué)指標(biāo)，特別是對紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞比積以及血沉等影響較大。除此之外，紅細(xì)胞的滲透脆性也隨EM添加濃度的升高而降低。
3 結(jié)果及分析
3．1 EM與血象 由表3可以看出，在飼料中添加不同濃度的EM后，試驗(yàn)魚的血液學(xué)指標(biāo)出現(xiàn)了規(guī)律性的變化。隨著EM在飼料中添加量的增加，紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量、血沉以及紅細(xì)胞比積等指標(biāo)呈上升趨勢，而紅細(xì)胞脆性則逐漸降低。由此可見，EM可以改變魚類的血液學(xué)指標(biāo)，促進(jìn)機(jī)體的新陳代謝，這與黃永春等利用EM作為飼料添加劑飼養(yǎng)建鯉，試驗(yàn)組魚類的紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白指標(biāo)均優(yōu)于對照組的結(jié)論是一致的。蘇聯(lián)學(xué)者普契科夫和費(fèi)多洛娃研究認(rèn)為，食物的成分也能對魚類的血液成分（特別是紅細(xì)胞和血紅蛋白含量）發(fā)生明顯影響。
表1 基礎(chǔ)日糧配比及營養(yǎng)水平
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魚粉 蠶蛹 面粉 米皮糠 豆粕 菜粕 玉米蛋白粉 磷酸二氧鈣 預(yù)混料 粘合劑
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30 6 30 8 6 12 5 1.5 1.2 0.3
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表2 EM飼養(yǎng)大口鯰的增重效果
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對照組(0) 試驗(yàn)1組(2 %) 試驗(yàn)2組(4%) 試驗(yàn)3組(6 %)
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1# 2# 3# 4# 5# 6# 7# 8#
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開始體長(cm) 10.5-18.2 10.2-18.0 10.3-17.8 10.5-17.5 10.2-18.3 9.0-17.5 10.1-18.4 10.5-18.5
結(jié)束體長(cm) 12.1-23.4 12.0-23.0 13.2-23.7 13.0-23.5 13.7-24.4 13.5-24.0 14.2-25.0 14.5-25.1
平均始重(g) 18.90 19.10 19.00 18.75 18.80 19.00 18.90 19.00
平均末重(g) 81.38 82.18 89.74 88.71 96.95 96.91 98.54 99.47
平均增重(g) 62.48 63.08 70.74 69.96 78.15 77.91 79.64 80.47
平均日增重(g) 1.56 1.58 1.77 1.75 1.95 1.95 1.99 2.01
平均值 1.57 1.76 1.95 2.00
凈增重率(%) 330.53 372.98 412.69 422.16
成活率(%) 87.0 93.0 96.0 95.5
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表3 EM飼養(yǎng)大口鯰的各項(xiàng)血液指標(biāo)變化
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試驗(yàn)3組(6%) 試驗(yàn)2組(4 %) 試驗(yàn)1組(2%) 對照組(0)
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測定項(xiàng)目 平均值 平均值 平均值 平均值
變化范圍 變化范圍 變化范圍 變化范圍
(X±λ) (X±λ) (X±λ) (X±λ)
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紅細(xì)胞數(shù)(萬/mm3)80-260 212.3±37.73 171-255 201.4±29.46 161-248 190.9±14.20 150-234 182.3±17.58
白細(xì)胞數(shù)(萬/mm3)1.15-4.65 1.88±0.54 1.20-4.08 1.82±0.48 1.23-4.61 1.80±0.64 1.31-4.80 1.93±0.67
血紅蛋白含量(g/%)5.80-9.72 7.24±0.97 5.52-8.99 6.82±0.58 5.34-8.40 6.60±0.43 4.2-7.60 5.97±0.40
紅細(xì)胞長徑9.60-14.4 11.59±1.56 10.08-14.4 11.66±1.3 12.00-13.2 11.78±0.48 12.00-16.8 12.23±1.78
(μm) 短徑 6.72-8.40 7.26±0.57 7.20-9.60 7.35±0.75 7.24-10.08 7.48±0.93 7.68-11.02 8.36±1.35
淋巴細(xì)胞 40-85 67.2±13.2 58-89 67.3±12.4 35-88 67.1±12.8 42-90 68.3±3.6
白細(xì)胞 中性粒細(xì)胞 11-18 28.3±9.1 7-27 29.2±2.4 10-39 29.5±2.3 11-38 28.3±5.0
分類 堿性粒細(xì)胞 0 0 0 0 0 0 0 0
(%) 酸性粒細(xì)胞 2-5 3.3±2.16 2-4 3.2±0.98 1-6 3.1±2.16 2-7 3.1±1.73
單核細(xì)胞 0-1 0.3±0.12 0-1 0.2±0.1 0-1 0.2±0.21 0-4 0.3±0.61
RBC脆性(gNaCl%) 0.45-0.25 0.45-0.30 0.45-0.30 0.55-0.40
血 沉(mm/h)1.8-3.0 2.23±0.16 1.5-2.5 1.97±0.46 1.5-2.4 1.83±0.31 1.3-2.0 1.71±0.26
紅細(xì)胞比積(%)25.2-67.3 44.7±67.3 25.2-65.2 42.8±2.0 25.7-62.7 41.4±3.8 22.2-68.9 40.8±4.3
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血液是動(dòng)物體內(nèi)一種極其重要的組織。正常血液學(xué)指標(biāo)值能反映物種的屬性和動(dòng)物的正常生理狀態(tài)。魚類血液與機(jī)體的代謝、營養(yǎng)狀況以及疾病有著密切的關(guān)系，當(dāng)魚體受到外界因子的影響而發(fā)生生理或病理變化時(shí)，必定會(huì)在血液指標(biāo)中反映出來。因此，血液指標(biāo)被廣泛地用來評價(jià)魚類的健康狀況、營養(yǎng)狀況以及對環(huán)境的適應(yīng)狀況，是重要的生理、病理和毒理學(xué)指標(biāo)。對魚類血液進(jìn)行研究，不僅在魚類血液生理的基礎(chǔ)理論方面是重要的，而且在魚類的人工養(yǎng)殖、魚病防治方面也是重要的。
魚類血注液學(xué)指標(biāo)受多種因素的影響而有較大的差異。雌鯽魚饑餓半個(gè)月，紅細(xì)胞數(shù)下降40%；但當(dāng)餌料充足、營養(yǎng)條件好時(shí)血紅蛋白含量明顯增高。沈曉民等在研究“團(tuán)頭魴血液指標(biāo)與水環(huán)境的關(guān)系”時(shí)發(fā)現(xiàn)，魚類缺氧代償能力的獲得主要靠增加紅細(xì)胞和血紅蛋白的數(shù)量，而不是增加紅細(xì)胞體積、胞內(nèi)血紅蛋白含量和血紅蛋白濃度。白細(xì)胞的主要作用是保護(hù)機(jī)體、抵御病害的侵襲。魚類在患病，特別是出現(xiàn)炎癥時(shí)，白細(xì)胞數(shù)量常常增多。
試驗(yàn)結(jié)果表明：在大口鯰日糧中添加微生態(tài)制劑EM，3個(gè)試驗(yàn)組中的紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白含量均比對照組有較大的提高，大口鯰運(yùn)輸O2和CO2的能力加強(qiáng)，從而在一定程度上改善了機(jī)體組織的代謝強(qiáng)度。說明EM能在一定程度上改善了機(jī)體的微生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)魚體的攝食、消化和吸收，使魚類表現(xiàn)出較佳的生理狀態(tài)——血液學(xué)指標(biāo)明顯改善、耗氧率下降，從而具備較高的抗逆性（如抗病、抗低氧等）。在正常情況下，血紅蛋白含量的變化與紅細(xì)胞數(shù)量有直接的關(guān)系，表現(xiàn)為隨紅細(xì)胞數(shù)量增加而增加。而血紅蛋白的主要功能是運(yùn)輸氧和二氧化碳。因此，當(dāng)機(jī)體血紅蛋白含量增加時(shí)，新陳代謝活動(dòng)加快，使魚類對抗惡劣環(huán)境的應(yīng)激能力提高，以適應(yīng)生存的需要。
試驗(yàn)測定結(jié)果還表明，在大口鯰日糧中添加EM能夠調(diào)節(jié)機(jī)體微生態(tài)平衡，促進(jìn)新陳代謝，改善紅細(xì)胞膜的組成成分和膜的流動(dòng)性，使紅細(xì)胞膜的滲透脆性下降，而起到一種保護(hù)作用。證明了微生態(tài)制劑在維持機(jī)體正常代謝水平及正常生理功能方面有非常重要的作用。這一結(jié)論與吳垠等的研究結(jié)果是一致的。
3．2 血液指標(biāo)與生長 試驗(yàn)對添加不同EM濃度的飼料飼養(yǎng)大口鯰及其血液學(xué)指標(biāo)的測定結(jié)果表明，隨著飼料飼養(yǎng)大口鯰及其血液學(xué)指標(biāo)的測定結(jié)果表明，隨著飼料中EM添加量的增加，大口鯰生長速度得到了提高，同時(shí)對應(yīng)的大口鯰血液學(xué)指標(biāo)也得到了明顯的改善。許多研究表明，魚類對環(huán)境具有較強(qiáng)的適應(yīng)性，在冬季魚類的血細(xì)胞數(shù)量減少，而在春季產(chǎn)卵前劇烈增加；血紅蛋白隨著血細(xì)胞的增加而增加；患病魚體內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量常常增多。顯示了在良好的營養(yǎng)狀態(tài)和生理狀態(tài)下，血細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白量上升趨勢，而白細(xì)胞數(shù)量則呈現(xiàn)下降趨勢。試驗(yàn)結(jié)果也證明了這一點(diǎn)：EM進(jìn)入魚體腸道后，改善了魚體消化和吸收狀態(tài)，促進(jìn)了大口鯰的快速生長（見表2）。同時(shí)使大口鯰血液學(xué)指標(biāo)得到了明顯的改善（見表3），特別是血細(xì)胞和血紅蛋白量的增加，保證了魚類機(jī)體組織對O2的需求和CO2的排除，提高了大口鯰的代謝強(qiáng)度，使大口鯰的生長速度加快、成活率提高。
3．3 EM與魚類生長 由表2可知，在飼料中添加EM后，大口鯰生長速度有了較大的提高，試驗(yàn)3組的大口鯰日增重達(dá)到2.00 g，凈增重率高達(dá)422.16 %，比對照組大口鯰的生速度提高了27.39 %；試驗(yàn)2組的大口鯰日增重達(dá)1.95 g，凈增重率為412.69 %，比對照組大口鯰的生長速度提高了24.2 %；即使是生長速度較差的試驗(yàn)1組的凈增重率也達(dá)到了372.98%，比對照組大口鯰的生長速度提高了2.10 %。由此可見，添加EM后，大口鯰的生長速度明顯提高，日增重率也呈現(xiàn)上升趨勢。這一結(jié)果與我國水產(chǎn)工作者對其他水生動(dòng)物所作的試驗(yàn)是一致的。
劉江軍等在河鲀養(yǎng)殖試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，飼料中添加EM后河鲀增重率明顯提高，試驗(yàn)池河鲀凈增重125g，增重率達(dá)208.3 %，而對照池增重76.5g，增重率只有130.7 %。黃永春等將EM添加在飼料中飼喂長毛蝦時(shí)發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組的成活率均高于對照組，增重率也均優(yōu)于對照組。EM中的各種有益微生物不僅有較多的優(yōu)良蛋白質(zhì)、還含有豐富的維生素、類胡蘿卜素和生長促進(jìn)因子。因此，EM不僅能改善水質(zhì)環(huán)境，而且能提高餌料生物的品質(zhì)和對蝦的攝食量以及消化吸收能力，促進(jìn)生長。
王旭明等發(fā)現(xiàn)，EM對飼料具有明顯的酸化作用，能提高飼料中氨基酸的含量，這可能是EM提高蛋白質(zhì)和氨基酸的利用率，促進(jìn)動(dòng)物生長的機(jī)理之一。在養(yǎng)殖業(yè)中，能提高飼料酸度（pH值降低）的一類物質(zhì)被稱作飼料酸化劑。將飼料酸化可以改善動(dòng)物的生產(chǎn)性能。EM在發(fā)酵飼料過程中，一方面能顯著降低飼料的pH值，起到了酸化劑的作用，使胃內(nèi)pH值下降，從而激活胃蛋白酶原轉(zhuǎn)化為胃蛋白酶，促進(jìn)蛋白質(zhì)的分解；對于消化系統(tǒng)尚未發(fā)育完善的幼齡動(dòng)物來說，作用更明顯。另一方面，酸性物質(zhì)還能降低胃腸蠕動(dòng)，減緩排空時(shí)間，從而提高消化吸收率。同時(shí)，由于酸性物質(zhì)的配位作用，可促進(jìn)胃腸道對鈣、磷等礦物質(zhì)的吸收。飼料酸化還是提高日糧適口性的重要因素。日糧中的酸能直接刺激口腔內(nèi)味蕾細(xì)胞，使唾液分泌增多而增進(jìn)食欲；而且有機(jī)酸具有獨(dú)特的芳香，可掩蓋飼料中的不適氣味。除此之外，胃腸道的酸性環(huán)境還可以阻止機(jī)體內(nèi)部大腸桿菌的繁殖，刺激有益菌的生長。該種有益菌進(jìn)入動(dòng)物體后可作為一種外來抗原，誘導(dǎo)T細(xì)胞和B細(xì)胞的增殖和分化，提高動(dòng)物的免疫能力。
4 小結(jié)
4．1 EM作為飼料添加劑，能明顯提高大口鯰的生長速度和成活率，且添加量越多效果越明顯。
4．2 EM作為飼料添加劑，能明顯的改善大口鯰的血液學(xué)指標(biāo)，特別是對于提高魚體血液中血細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白含量具有積極作用，這對于促進(jìn)魚類的健康生長有著重發(fā)的意義。
5 尚需深入研究的課題
5．1 EM是活的復(fù)合微生物菌群，在進(jìn)行飼喂時(shí)究竟是何種菌對血液學(xué)指標(biāo)起主要作用還有待進(jìn)一步研究。
5．2 試驗(yàn)所添加的EM濃度只是針對大口鯰，在其他魚類養(yǎng)殖中的最適濃度還需進(jìn)一步探討。
5．3 試驗(yàn)中添加的EM最高濃度是6 %，添加更高濃度是否效果更佳尚有待進(jìn)一步研究。
